親和色譜(Affinity chromatography,又稱為親和層析)是一種利用固定相的結(jié)合特性來(lái)分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過(guò)濾色譜柱上連接與待分離的物質(zhì)有一定結(jié)合能力的分子,并且這種結(jié)合是可逆的,在改變流動(dòng)相條件時(shí)二者還能相互分離。親和色譜可以用來(lái)從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來(lái)去除或減少混合物中某一分子的含量。
親和色譜具有高選擇性,而且能有效地保持生物大分子高級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,同時(shí)還具有對(duì)活性樣品高回收率的特點(diǎn),所以親和色譜可以用來(lái)從細(xì)胞提取物中分離純化核酸、蛋白質(zhì),還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經(jīng)常使用親和色譜。
BioToolomics開發(fā)了多種親和層析填料,比如谷胱GAN肽親和層析填料、蛋白A親和層析填料、蛋白G親和層析填料、鈷親和層析填料、鎳親和層析填料和肝素親和層析填料等。
谷胱GAN肽親和層析填料(Glutathione SepFast)是一種用于快速純化谷胱GAN肽s -轉(zhuǎn)移酶(GST)標(biāo)記蛋白的親和層析填料,可以快速純化細(xì)菌、酵母、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)的GST標(biāo)記蛋白。
蛋白A親和層析填料和蛋白G親和層析填料是一種用于純化免疫球蛋白的親和層析介質(zhì),可以用于從生物體液和細(xì)胞培養(yǎng)基中分離和純化免疫球蛋白的類別、亞類和片段:
·Protein A SepFast Large Bead和Protein G SepFast Large Bead,粒徑:150 - 350µm,特別適合處理粘性或含細(xì)胞的原料(即高沉降率和極低的柱壓);
·Protein A SepFast HighRes和Protein G SepFast HighRes,粒徑:20 – 50 µm,適合小柱運(yùn)行,停留時(shí)間短(即較高的流速);
·Protein A SepFast和Protein G SepFast,粒徑:50 – 150 µm,適用于大多數(shù)從小規(guī)模到大規(guī)模的純化需求(即低柱壓);
固定化金屬親和色譜 (IMAC) 基于某些過(guò)渡金屬離子(主要是Ni2+、Zn2+和Co2+)與含有組AN酸(或半胱AN酸和色AN酸)的暴露氨基酸表面鏈之間的特定相互作用。IMAC用于純化在細(xì)菌、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的帶組AN酸標(biāo)簽的重組蛋白,還可用于純化某些天然的非標(biāo)記蛋白質(zhì),例如干擾素、凝集素、抗體、血清和血漿蛋白、肽和肽激素。IMAC SepFast或其三種帶金屬電荷的形式(Ni SepFast、Co SepFast和Zn SepFast),具有高度穩(wěn)定性并與蛋白質(zhì)純化過(guò)程中常用的多種化學(xué)品(例如去垢劑、變性試劑和還原劑等)兼容。
肝素親和層析填料(Heparin SepFast)用于純化對(duì)肝素有親和力的生物分子,如抗凝XUE酶III、凝XUE因子和其他血漿蛋白、DNA 結(jié)合蛋白、脂蛋白、蛋白質(zhì)合成因子、作用于核酸的酶和類固醇受體等。
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